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目前，如果想知道河流、湖泊、水库等地表水是否富营养化，可以通过检测水中磷、氮等营养物质的含量，或者通过观察水中藻类的繁殖情况来判断。 .但是我们今天要讲的是通过检测水中的叶绿素a来判断水体是否富营养化。我们都知道，水体富营养化最重要的表现就是藻类在水中的大量繁殖，而所有的藻类都含有叶绿素a。因此，可以通过水体中叶绿素a的含量来判断水中藻类的数量。
该方法的原理是用滤膜过滤一定量的样品以截留藻类，研磨破碎藻类细胞，用丙酮溶液提取叶绿素，在750nm、664nm、647nm和630nm波长测量提取物的吸光度离心后。该公式计算了水中叶绿素 a 的浓度。收集河流中的叶绿素 a 水样
测试所需的试剂和仪器
实验试剂
1 丙酮。
2 碳酸镁。
3 丙酮溶液：9+1。
将 100ml 实验用水加入到 900ml 丙酮中。
4 碳酸镁悬浮液。
称取1.0g碳酸镁，加入100ml实验水，搅拌成混悬液（使用前摇匀）。
5 玻璃纤维膜：直径47mm，孔径0.45um-0.7um。
实验设备
1 个采样瓶：1L 或 500ml 棕色玻璃瓶，带接地塞。
2过滤装置：配备真空泵和玻璃砂过滤装置。
3 研磨装置：玻璃研钵或其他组织研磨机。
4 离心机：相对离心力可达1000×g（转速3000r/min～4000r/min）。
5 玻璃刻度离心管：15ml，螺帽材料不与丙酮反应。
6 可见分光光度计：带 10mm 石英比色皿。
7 注射器过滤器：0.45um PTFE 有机相注射器过滤器。
8 通用实验室仪器和设备。
水样采集和保存
水样一般使用有机玻璃集水器或其他合适的采样器采集对于水面以下0.5m的水样，可根据需要在湖泊、水库中进行分层采样或混合采样，采样量为1L或500ml。如果水样中含有沉积固体（如沉积物等），
水样应充分摇匀，然后倒入 2L 量筒中。让它在黑暗中静置 30 分钟，在水面以下 5cm 处取一个水样并转移到取样瓶中。向每升水样中加入 1 ml 碳酸镁悬浮液，以防止酸化导致颜料溶解。
水样采集后应在0°C-4°C避光储存和运输，24小时内运至检测实验室过滤（如水样24小时内不能送至检测实验室，应现场过滤，滤膜避光（冷藏运输），水样滤膜-20℃避光保存，14天内完成分析。
准备水样
在过滤器单元上安装玻璃纤维过滤器。根据水体的营养状况确定采样量。有关详细信息，请参阅过滤水样的体积。用量筒量取一定体积的混合水样，过滤，最后用少量蒸馏水冲洗滤壁。过滤时，负压不应超过50kPa。当水样刚刚完全通过滤膜时，抽滤结束。用镊子取出滤膜，有水样的一面对折，滤膜用滤纸擦干。
叶绿素 a 是指过滤样品的体积
研磨
将样品过滤器放入研磨器中，加入3ml-4ml丙酮溶液，研磨成糊状。加入3ml-4ml丙酮溶液，继续研磨，重复1-2次，保证5min以上充分研磨。将完全破碎的细胞提取物转移到玻璃刻度离心管中，用丙酮溶液冲洗研钵和研杵，并一起转移到离心管中，并调整体积至10ml。
浸入式萃取
将离心管中的研磨提取液充分摇匀混匀后，用铝箔包裹，4℃避光放置2小时以上，但不超过24小时。浸泡过程中颠倒摇晃2-3次。
离心
将离心管放入离心机中，以1000×g（3000 r/min～4000 r/min）的相对离心力离心10分钟。然后用针头过滤器过滤上清液，得到叶绿素a的丙酮提取物（样品）供检测。
检测步骤
水样的测定
将样品移至比色皿中，以丙酮溶液为参比溶液，分别在 750nm、664nm、647nm 和 630nm 波长处测量吸光度。 750nm波长处的吸光度应小于0.005，否则需用针头过滤器再次过滤后再测定。
最终水样中叶绿素a的质量浓度可按相应公式计算。
以上内容来自《HJ 897-2017 水质中叶绿素a的分光光度法测定》
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181-5666-5555
